Главная страница

Биохимия крови


НазваниеБиохимия крови
АнкорUchebnoe_posobie_Bioh._KROVI.doc
Дата30.09.2017
Размер161 Kb.
Формат файлаdoc
Имя файлаUchebnoe_posobie_Bioh._KROVI.doc
ТипДокументы
#31601
Каталогpublic51167928

С этим файлом связано 75 файл(ов). Среди них: Obmen_lipidov-4.doc, Obmen_uglevodov.doc, Obmen_lipidov-3.doc, Obmen_lipidov_1.doc, Uchebnoe_posobie_Bioh._KROVI.doc, Pishevar metod. 2.doc и ещё 65 файл(а).
Показать все связанные файлы

Тема: Биохимия крови.

Занятие №1.
Актуальность темы.

Врач должен знать химический состав и физико-химические свойства крови, поскольку малейшие изменения в организме сопровождаются изменением в составе крови. В связи с этим, проведение определения в сыворотке крови белковых фракций и общего белка, мочевины и креатинина имеет важное значение в диагностике различных заболеваний.

Учебные и воспитательные цели:

Общая цель: привить знания о клиническом значении биохимического анализа крови в практике врача.

Частные цели:

- уметь определять количество общего белка и белковых фракций в сыворотке крови рефрактометрическим методом;

- владеть электрофоретическим методом определения белковых фракций.


  1. Входной контроль знаний.

    1. Тесты.

    2. Устный опрос.




  1. Основные вопросы темы:

    1. Что такое кровь и каковы ее функции?

    2. Физико-химические свойства и химический состав крови.

    3. Белки крови и их роль в организме.

    4. Гипопротеинемия, гиперпротеинемия, диспротеинемия, парапротеинемия, причины возникновения.

    5. Небелковые азотсодержащие вещества крови. Клиническое значение определения мочевины, креатинина в крови.

    6. Клиническое значение биохимического анализа крови.




  1. Лабораторно-практические работы:

    1. Методика определения общего белка и белковых фракций в сыворотке крови рефрактометрическим методом;

    2. Методика определения белковых фракций методом электрофореза на бумаге.




  1. Выходной контроль.

    1. Ситуационные задачи.




  1. Литература.

    1. Материал лекций.

    2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990.С. 567-582.

5.3. Биохимия под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева М.: ГЭОТАР-МЕД, 2011г.

2. Основные вопросы темы.
2.1. Что такое кровь и каковы ее функции?

КРОВЬ – жидкая подвижная ткань, обеспечивающая постоянство внутренней среды организма.

Функции крови:

- Дыхательная – Hb транспортирует кислород и углекислый газ;

- Транспортная – перенос питательных веществ, промежуточных и конечных метаболитов обмена веществ;

- Выделительная функция – удаляет конечные продукты обмена (мочевина, креатинин, мочевая кислота и др.);

- Защитная – участвует в иммунитете (иммуноглобулины), в процессе свертывания (фибриноген);

- Регуляторная – осуществляет транспорт гормонов к органам мишеням;

- Терморегуляторная – поддерживает постоянство температуры тела в разных его частях.

2.2. Физико-химические свойства и химический состав крови.

Общий объем крови взрослого человека составляет 5-6 л или 7-8% массы тела, у детей эта цифра несколько выше. Кровь состоит из жидкой части плазмы и форменных элементов (эритроциты, лейкоциты и тромбоциты).

Физико-химические свойства крови:

- Поддерживает кислотно-щелочной баланс. В норме рН крови – 7,36-7,4;

- Вязкость крови в 5-6 раз выше вязкости воды;

- Относительная плотность цельной крови – 1,050-1,064;

- Осмотическое давление плазмы крови ≈ 7,6 атм.

Химический состав крови:

1.Белки плазмы (альбумины, глобулины, фибриноген) – 7%;

2.Небелковые компоненты (глюкоза, липиды, аминокислоты, креатин, мочевина, билирубин) – 2%;

3.Неорганические компоненты (NaCl, CaCl2, Na2HРO4) – 0,9%.
2.3. Белки крови и их роль в организме.
Белки крови: альбумины, глобулины, фибриноген

Содержание общего белка у взрослых – 65-85 г/л, у грудных детей – 41-73 г/л

Функции белков крови:

- Обуславливают онкотическое давление крови;

- Поддерживают постоянство рН крови;

- Обуславливают вязкость крови;

- Осуществляют транспорт нерастворимых в воде веществ (жирные кислоты, билирубин, аспирин и др.);

- Участвуют в иммунитете (γ-глобулины);

- Участвуют в свертывании крови (фибриноген);

- Являются резервом аминокислот (при белковом голодании и др.).

Альбумины: содержание – 40-50 г/л, молекулярная масса – 68-70 тыс. дальтон

Глобулины

Содержание глобулинов в крови – 20-30 г/л. Молекулярная масса – 160-180 тыс. дальтон

Методом электрофореза на бумаге выделены α1, α2, β и γ-глобулиновые фракции.

α и β-глобулины синтезируются в печени, а γ-глобулины - В-лимфоцитами.

α1- глобулины:

- Ингибиторы протеиназ (антитрипсин и т.д.);

- Протромбин

α2- глобулины:

- Церулоплазмин – белок небесно-голубого цвета, транспортирует медь, поддерживая нормальный уровень её в тканях, особенно в печени;

- Гаптоглобины – комплексы белка с гемоглобином. Эти комплексы не могут экскретироваться (высокая м.м.) почками, предотвращается потеря Fe;

- Антитромбин III

- Ретинолсвязывающий белок – транспорт ретинола

β-глобулины:

- Трансферрин – транспорт Fe в различные ткани;

- Фибриноген

γ-глобулины (иммуноглобулины) – антитела

У новорожденных и детей грудного возраста антитела не синтезируются и должны поступать в составе грудного молока.

Фибриноген – 2-4 г/л, молекулярная масса – 330 тыс. дальтон.
2.4. Гипопротеинемия, гиперпротеинемия, диспротеинемия, парапротеинемия, причины возникновения.
Гипопротеинемия – уменьшение содержания общего белка крови. Наблюдается при кровотечениях, злокачественных новообразованиях, нарушениях функции почек, печени, голодании и др.

Гиперпротеинемия – повышение содержания общего белка крови.

Относительная гиперпротеинемия связана с потерей воды, а, следовательно, повышением концентрации общего белка (поносы, рвота, сахарный и несахарный диабет, холера, дизентерия).

Абсолютная гиперпротеинемия возникает вследствие повышенного образования белков, например, образование γ-глобулинов при инфекционных заболеваниях.

Диспротеинемии –это изменения в соотношении отдельных белковых фракций.

В норме А/Г=1,5-2,3 (альбумино-глобулиновый коэффициент). Содержание общего белка остается в норме.

Причины:

- Нарушения функций почек, А/Г коэффициент уменьшается за счет потери в большей степени альбуминов;

- Нарушения функций печени. А/Г коэффициент снижается за счет уменьшения синтеза альбуминов и глобулинов;

- Инфекционные заболевания, сопровождающиеся повышением антител.

Парапротеинемии – появление белков, которые не существуют в норме.

- Интерферон – специфический белок, синтезирующийся в организме в результате проникновения различных вирусов;

- С-реактивный белок – появляется в крови в острый период болезни (белок острой фазы) или в период обострения хронического процесса (пневмония, ревматизм и др.);

- Миеломные белки – при миеломной болезни;

- Макроглобулины – при макроглобулинемия Вальденстрема;
2.5. Небелковые азотсодержащие вещества крови. Клиническое значение определения мочевины, креатинина в крови.

К ним относятся конечные продукты обмена: мочевина – 50%, аминокислоты – 25%, мочевая кислота, креатин, креатинин, билирубин, индикан, холин, нуклеотиды, полипептиды. Азот, входящий в состав этих соединений - «остаточный азот», т.е. остающийся в фильтрате после осаждения белков.

В норме - 14,2-28,4 ммоль/л. При некоторых заболеваниях эта величина повышается (азотемия).

Азотемия:

1.Ретенционная – почечная и внепочечная (сердечно-сосудистая недостаточность, снижение АД, снижение почечного кровотока).

2.Продукционная – усиленный распад белков тканей: злокачественные новообразования, ожоги, кахексия.

В настоящее время вместо остаточного азота крови определяют содержание мочевины и креатинина.

В норме: Мочевина- 3,3-8,3 ммоль/л

Креатинин-0,044-0,11 ммоль/л.
2.6. Клиническое значение биохимического анализа крови.

В норме химический состав крови постоянен, но может отражать малейшие изменения в метаболизме организма. Учитывая доступность этой биологической жидкости и возможность многократного проведения биохимического анализа крови, создается возможность по анализу крови установить диагноз, прогноз заболевания, а также осуществить контроль эффективности лечения.

3. Лабораторно-практические работы.
3.1. Методика определения общего белка и белковых фракций в сыворотке крови рефрактометрическим методом.

ПРИНЦИП МЕТОДА состоит в том, что степень рефракции обусловлена количеством растворенных в растворе частиц. Практически коэффициент рефракции сыворотки крови довольно точно свидетельствует о количественном содержании в ней белка.

ХОД АНАЛИЗА:

Взять 2 пробирки для центрифугирования. В одну отмерить 0,6 мл сыворотки крови, а в другую - 0,6 мл воды. Затем той же пипеткой в обе пробирки добавить по 0,6 мл насыщенного раствора сернокислого аммония. Раствор сернокислого аммония к сыворотке крови добавляют маленькими порциями, медленно, чтобы не образовались пузырьки при этом происходит осаждение глобулина. Легкими поворотами содержимое пробирки осторожно смешивают и центрифугируют пробирку с сывороткой крови 5 мин при скорости 1000 – 1500 об/мин.

Пока происходит центрифугирование сыворотки, рефрактометрируют:

  1. Н2О (дистиллированная)

  2. Полунасыщенный раствор сернокислого аммония (2-ая пробирка).

  3. Неосажденную сыворотку.

Записывают результаты рефрактометрирования - показатель рефракции (НД).

Рефракция солей сыворотки - величина постоянная и равна 0,002.

Из отцентрифугированной сыворотки берут каплю из прозрачного верхнего слоя и также рефрактометрируют.
РАСЧЕТ ДЛЯ АЛЬБУМИНОВ:

НД альбуминов = (НД осажденной сыворотки - НД полунасыщенного р-ра сернокислого аммония х 2 - 0,002/ показатель рефракции солей сыворотки).

1% р-р альбуминов имеет показатель рефракции равный 0,00177, затем рассчитывают процентное содержание альбуминов:
1% - 0,00177 1х НД альб.

Х% - НД альбуминов Х = 0,00177
РАСЧЕТ ДЛЯ ГЛОБУЛИНОВ:

НД альбуминов = (НД неосажденной сыворотки - НД воды - НД альбуминов - 0,002). 1% р-р глобулинов имеет показатель рефракции равный 0,00229. По пропорции находят содержание глобулинов:

1% - 0,00229 1х НД глоб.

Х% - НД глобулинов Х= 0,00229

По сумме альбуминов и глобулинов находят общий белок и коэффициент А/Г.
3.2. Методика определения белковых фракций методом электрофореза на бумаге.

ПРИНЦИП МЕТОДА: Метод основан на различии величины заряда белков сыворотки крови. Если нанести каплю сыворотки на полоску хроматографической бумаги, смоченной буферным раствором, и пропустить через эту полоску постоянный электрический ток, отдельные белки будут продвигаться в электрическом поле с различной скоростью. При рН=8,6 белки сыворотки крови движутся по направлению к аноду, поскольку они обладают в этих условиях отрицательным зарядом. Наиболее быстро движутся альбумины, затем 1- и 2-глобулины, далее - глобулины и наконец - глобулины.

АППАРАТУРА: Прибор для определения белков в крови методом электрофореза на бумаге состоит из выпрямителя, электрофоретической кюветы и денситометра.

ХОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ:

Кюветы заполняются вероналовым буфером рН = 8,6. Нарезают из хроматографической бумаги полоски длиной 38 см., шириной 3 см., полоски смачивают буферным раствором и помещают в кювету. Ближе к отрицательному полюсу наносится сыворотка (0,01 мл), затем прибор включается в электрическую сеть.

Электрофоретическое разделение белков сыворотки на бумаге производится обычно в течение 6- 24 часов при напряжении 150 Вт и силе тока 6-8 А. По истечении указанного срока бумажные полоски сушат в сушильном шкафу при температуре около 100 градусов в течение 5 мин., затем красят бромфеноловым синим. Остатки красителя, не связавшегося с белками, отмывают с полоски бумаги 10% уксусной кислотой.

Количественное определение белковых фракций проводится с помощью денситометра или путём экстрагирования спиртовым раствором щелочи с последующим определением концентрация краски фотоколориметрически.

Тема: Биохимия крови. Метаболизм гемоглобина.
Занятие №2.
Актуальность темы.

Минеральный состав крови чрезвычайно разнообразен и играет большую роль в жизнедеятельности организма, например, в процессе роста и развития ребенка обмен кальция и связанных с ним фосфатов. Снижение содержания кальция может сопровождаться повышением нервно-мышечной возбудимости, судорогами (тетания новорожденных). Развитию гипокальциемии у новорожденных способствует сахарный диабет у матери, недоношенность и т.д. Чрезмерные дозы витамина «Д» вызывают гиперкальциемию с отрицательными последствиями для организма.

Основным белком, осуществляющим снабжение тканей кислородом и освобождение их от углекислоты, является гемоглобин. В связи с этим, изучение обмена гемоглобина и определение его концентрации является чрезвычайно важным, а также актуальным является клиническое значение определения содержания желчных пигментов крови, моче и кале в дифференциальной диагностике различных видов желтух (гемолитическая, желтуха новорожденных, обтурационная, паренхиматозная).

Учебные и воспитательные цели:

Общая цель: привить знания о минеральном составе крови, механизме свертывания крови, метаболизме гемоглобина.

Частные цели:

- уметь определять уровень кальция в сыворотке крови;

- владеть методикой определения концентрации гемоглобина в крови.


  1. Входной контроль знаний.

    1. Тесты.

    2. Устный опрос.




  1. Основные вопросы темы:

    1. Минеральные составные части крови, значение их для организма.

    2. Механизм свертывания крови.

    3. Противосвертывающая система и система фибринолиза.

    4. Метаболизм гемоглобина. Синтез гема, гемоглобина.

    5. Распад гемоглобина. Прямой (конъюгированный) и непрямой (неконъюгированный) билирубин.

    6. Клиническое значение определения содержания желчных пигментов крови, моче и кале в дифференциальной диагностике различных видов желтух (гемолитическая, желтуха новорожденных, обтурационная, паренхиматозная).




  1. Лабораторно-практические работы:

    1. Методика определения кальция в сыворотке крови;

    2. Методика определения концентрации гемоглобина в крови.




  1. Выходной контроль.

    1. Ситуационные задачи.




  1. Литература:

    1. Материалы лекций.

    2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. С. 582-585, 599-607.

5.3. Биохимия под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева М.: ГЭОТАР-МЕД, 2011г.


2. Основные вопросы темы:


    1. Минеральные составные части крови, значение их для организма.

Различают несколько фракций кальция: ионизированный кальций, кальций неионизированный, но способный к диализу, и недиализирующийся (недиффундирующий), связанный с белками кальций.

Кальций принимает активное участие в процессах нервно-мышечной возбудимости (как антагонист ионов К+), мышечного сокращения, свертывания крови, образует структурную основу костного скелета, влияет на проницаемость клеточных мембран и т.д.

Отчетливое повышение уровня кальция в плазме крови наблюдается при развитии опухолей в костях, гиперплазии или аденоме паращитовидных желез. В таких случаях кальций поступает в плазму из костей, которые становятся ломкими.

Важное диагностическое значение имеет определение уровня кальция при гипокальциемии. Состояние гипокальциемии наблюдается при гипопаратиреозе. Нарушение функции паращитовидных желе приводит к резкому снижению содержания ионизированного кальция в крови, что может сопровождаться судорожными приступами (тетания). Понижение концентрации кальция в плазме отмечают также при рахите, спру, обтурационной желтухе, нефрозах и гломерулонефритах.

    1. Механизм свертывания крови.

Система свертывания крови представляет собой каскадную цепь протеолитических реакций.

Каскадность реакций обеспечивает постепенное усиление первоначального слабого сигнала – воздействия, вызывающего активацию внутреннего и внешнего пусковых механизмов свертывания. Каждая последующая стадия приводит к образованию все больших количеств активной формы очередного фактора. Происходит лавинообразное нарастание «мощности» каждой следующей ступени каскада, в результате стадия превращения фибриногена в фибрин протекает очень быстро.

Первая стадия сокращение поврежденного сосуда.

Вторая стадияобразование белого тромба. Протромбин (VII фактор) под действием тромбопластина (III) тромбоцитов и ионов кальция (IV) превращается в активную форму – тромбин. В этой стадии участвуют факторы внешнего пускового механизма свертывания: проконвертин (VII); проакцелерин (V); фактор Стюарта (Х), а также факторы внутреннего пускового механизма свертывания: фактор Кристмаса (IХ); фактор Розенталя (ХI); фактор Хагемана (ХII)

Третья стадия – образование красного тромба. Тромбин активирует фибриноген (I), превращая его в активную форму фибрин – мономер. Затем образуется фибрин – полимер (фибриновый гель), который не отличается прочностью. Его легко может разрушить механическое воздействие. Под действием фермента трансглутаминазы (ХIIIa) образуются прочные ковалентные связи между мономерами фибрина, а также между фибрином и белком фибронектином, стабилизируя гель фибрина.

Через час тромб сжимается (ретракция тромба). Затем происходит фибринолиз (четвертая стадия). Плазминоген под действием фермента урокиназы и тканевого активатора плазминогена (ТАП) превращается в активную форму – плазмин (частичный протеолиз), который расщепляет в фибрине – полимере пептидные связи.

Тромб в течение нескольких дней рассасывается.




Роль витамина К в свертывании крови.
Витамин К входит в состав ферментов, катализирующих карбоксилирование глутаминовой кислоты с образованием γ-карбоксиглутаминовой кислоты, входящей в состав факторов свертывания крови: II, VII, IХ, Х.


    1. Противосвертывающая система.

Ингибиторы факторов свертывания крови:

  1. белок плазмы антитромбин III, инактивирующий большинство факторов свертывания крови;

  2. другие белки – ингибиторы протеиназ (α- макроглобулин, антиконвертин, тромбомодулин).

Антикоагулянты:

  1. гепарин, активирующий антитромбин III;

  2. антивитамины К – дикумарин, неодикумарин и др.




    1. Метаболизм гемоглобина. Синтез гема, гемоглобина.


2.5.Распад гемоглобина. Прямой (конъюгированный) и непрямой (неконъюгированный) билирубин.

Гемоглобин, освобождающийся из эритроцитов, которые разрушаются через 120 дней, в крови соединяется с гаптоглобином –α2-глобулин и транспортируется в клетки РЭС, главным образом селезенки. Здесь Нb окисляется в метгемоглобин, а затем подвергается распаду. При этом гаптоглобин отщепляется и переходит в кровь.

Под действием гемоксигеназы происходит расщепление α-метинового мостика гема, соединяющего два соседних пиррольных кольца. Кольцевая структура гема разрывается и образуется вердоглобин. От вердоглобина отщепляется железо, которое связывается с белком – трансферином и доставляется с кровью в печень и глобин. Глобин гидролизуется катепсинами селезенки до аминокислот и в результате образуется биливердин – желчный пигмент зеленого цвета, который восстанавливается при участии биливердинредуктазы в билирубин – желчный пигмент красно-желтого цвета. Он является токсичным, неконъюгированным (не связанным с глюкуроновой кислотой), непрямым (так как не может давать прямую реакцию с диазореактивом), плохо растворим в воде и крови и поэтому, транспортируется в печень в комплексе с альбумином. Одна молекула альбумина свободно присоединяет 10-35 молекул билирубина. Вследствие прочной связи с белком, билирубин не экскретируется с мочой.

В печени под действием УДФ – глюкуронилтрансферазы билирубин взаимодействует с глюкуроновой кислотой (в составе УДФ-ГК) образуется билирубинглюкуронид – конъюгированный, прямой, нетоксичный и хорошо растворимый в воде.

Билирубинглюкурониды лишь в незначительных количествах могут диффундировать в кровеносные капилляры. Поэтому в плазме крови присутствуют две формы билирубина: неконъюгированный – 75% и конъюгированный – 25%,- которые вместе составляют общий билирубин. Концентрация общего билирубина в крови здорового человека - 3,5-19 мкмоль/л, у грудных детей – 3,4-14 мкмоль/л.

В составе желчи прямой билирубин секретируется в 12-перстную кишку, где под действием гидролаз бактерий происходит отщепление глюкуроновой кислоты.

В тонком кишечнике билирубин под действием бактерий превращается в мезобилиноген (уробилиноген). Часть мезобилиногена всасывается в кишечнике и по воротной вене поступает в печень, где полностью расщепляется до моно- и дипирролов.

Большая часть мезобилиногена из тонкой кишки поступает в толстый кишечник, где под действием анаэробных бактерий восстанавливается до стеркобилиногена, который, как и уробилиноген, бесцветен.

Основная часть стеркобилиногена, выделяемая с каловыми массами, окисляется на воздухе в стеркобилин – оранжево-желтый пигмент, определяющий цвет каловых масс. В сутки с калом выделяется до 250 мг стеркобилина. Небольшая часть стеркобилиногена всасывается в прямой кишке, через систему геморроидальных вен поступает в нижнюю полую вену и через почки выводится с мочой. Стеркобилиноген мочи окисляется в стеркобилин, частично определяя нормальный соломенно-желтый цвет мочи. В сутки с мочой выделяется 1-4 мг стеркобилина.




2.6. Клиническое значение определения содержания желчных пигментов крови, моче и кале в дифференциальной диагностике различных видов желтух (гемолитическая, желтуха новорожденных, обтурационная, паренхиматозная).
Под влиянием различных факторов в организме может нарушаться образование и выведение билирубина и продуктов его метаболизма. Повышение содержания билирубина в крови ведет к отложению его в тканях, в том числе в слизистых оболочках и коже, вызывая их окрашивание в желтый цвет – возникновению желтухи.

В дифференциальной диагностике желтух различной этиологии важное значение имеет определение содержания желчных пигментов в крови, моче и кале.

Различают несколько видов желтух.

Гемолитическая желтуха

Возникает в результате усиленного гемолиза эритроцитов. Причины возникновения:

серповидноклеточная анемия, талассемии, стимулирующие гемолиз, переливания несовместимых групп крови и т.д. В результате при распаде Нb образуется большое количество непрямого, токсичного билирубина, который в печени не успевает конъюгироваться. Неконъюгированный билирубин не выделяется с мочой, так как он нерастворим в воде.

Для гемолитической желтухи характерны:

  • гипербилирубинемия за счет неконъюгированного билирубина;

  • увеличение содержания стеркобилина в кале и моче. В результате кал становится почти темного цвета, а моча окрашивается в интенсивно оранжево-желтый цвет.

Желтуха новорожденных

Желтуха новорожденных (гемолитическая желтуха) считается физиологической. Она возникает вследствии:

  • недостатка синтеза фермента конъюгации билирубина – УДФ – глюкуронилтрансферазы;

  • недостаточного образования УДФ – глюкуроновой кислоты;

Это приводит к повышению в крови уровня неконъюгированного, токсичного билирубина.

Желтуха обычно проходит через 3-5 дней. У недоношенных детей - продолжается дольше. Длительное повышение неконъюгированного билирубина может быть опасным, вследствие токсического действия билирубина на развивающийся мозг (билирубиновая энцефалопатия). У взрослых клетки мозга малопроницаемы для билирубина и, как правило, осложнений при гипербилирубинемии не происходит.

Обтурационная желтуха

Возникает в результате нарушения оттока желчи в кишечник.

Причины: закупорка или сдавление общего печеночного протока камнем или опухолью головки поджелудочной железы, некоторые формы вирусного гепатита и др.

Обтурационная желтуха сопровождается высоким содержанием в крови конъюгированного билирубина, вследствие того, что желчь не поступает в кишечник и билирубин всасывается из печени в кровь. Так как конъюгированный билирубин – водорастворимое соединение, он в больших количествах выделяется с мочой. Из-за этого моча имеет цвет пива с ярко-желтой пеной. Одновременно и в кале, и в моче снижается содержание стеркобилина. Кал приобретает серовато-белый, глинистый цвет.

Паренхиматозная желтуха

Возникает вследствие повреждения паренхимы печени (инфекционный и токсический гепатиты, цирроз печени и т.д.).

Повреждение гепатоцитов снижает захват ими неконъюгированного билирубина из крови и интенсивность образования в них конъюгированного билирубина. Поэтому, не смотря на нормальный гемолиз, повышается (но не так выражено, как при гемолитической желтухе) содержание неконъюгированного, а также конъюгированного билирубина (застой желчи). В каловых массах и в моче снижается содержание стеркобилина. Кал слабо окрашен. В моче появляется уробилин и небольшое содержание конъюгированного билирубина.
3. Лабораторно-практические работы.
3.1. Методика определения кальция в сыворотке крови.

ПРИНЦИП МЕТОДА: органические соединения-комплексоны взаимодействуют с кальцием. В качестве комплексона используется трилон Б (ЭДТА-этилендиаминтетраацетат). Трилоном Б титруют ионы кальция, предварительно связанные с мурексидом (индикатор). Комплекс кальций-мурексид имеет красно-оранжевый цвет.

ХОД РАБОТЫ: свободный от кальция мурексид окрашивается в сине-фиолетовый цвет.

  1. Готовится раствор мурексида для всей группы: в колбу вносят 100мл воды и 0,8мл 36% р-ра NaOH, перемешивают, затем добавляют смесь мурексида до появления ярко-фиолетовой окраски.

  2. В широкую пробирку наливают 5мл р-ра мурексида и вносят 0,2мл исследуемой сыворотки (раствор розовеет), титруют (без промедления) р-ром трилона Б до фиолетовой окраски.

РАСЧЕТ:

1мл 0,1 моль/л р-ра трилона Б эквивалентен 0,12 мг кальция

Х= х 0,12 х 100 мг%

- количество мл трилона Б, пошедшего на титрование опытной пробы.

Коэффициент перерасчета: 0,2495 на ммоль/л

N = 2,25 – 2,64 ммоль/л
3.2. Методика определения концентрации гемоглобина в крови.

ПРИНЦИП МЕТОДА: Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием (красная кровяная соль) окисляется в метгемоглобин, образующий с ацетонциангидридом окрашенный гемиглобинцианид, поглощающий свет при длине волны 540 (520-560) нм. Концентрация образовавшегося гемиглобинцианида пропорциональна концентрации гемоглобина.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

В пробирку вносят 5 мл трансформирующего раствора, затем добавляют 1 каплю крови и тщательно перемешивают. Инкубируют при комнатной температуре (+18-+20) в течение 20 минут и затем фотометрируют при длине волны 540 (520-560) нм.
Концентрация гемоглобина в пробе крови вычисляют по формуле:

Е________

С= Ек*Ск*251, где:

С – концентрация гемоглобина, г/л.

Е – оптическая плотность пробы;

Ек – оптическая плотность в калибровочном растворе гемиглобинцианида;

Ск –концентрация гемиглобинцианид в калибровочном растворе, г/л.

251 –коэффициент разведения пробы крови

Оптическая плотность калибровочного раствора гемиглобинцианида Ек=0,54

Ск = 0,602 г/л

Норма гемоглобина у мужчин равна 130-160 г/л , у женщин – 120-145 г/л
перейти в каталог файлов
связь с админом