Главная страница

Определение альбумина. Определение концентрации альбумина в сыворотке крови по реакции с бромкрезоловым зеленым Принцип метода


Скачать 23,5 Kb.
НазваниеОпределение концентрации альбумина в сыворотке крови по реакции с бромкрезоловым зеленым Принцип метода
Определение альбумина.doc
Дата20.10.2016
Размер23,5 Kb.
doc
Opredelenie_albumina.doc
ТипДокументы
#48

97 . : sbornik_situatsionnykh_zadach_po_biokhimii-1.docx, Metodichka_po_vitaminam_MGMSU.rar, Vvedenie_v_obmen_v-v.rar 87 .


Определение концентрации альбумина в сыворотке крови по реакции с бромкрезоловым зеленым
Принцип метода: Метод основан на образовании окрашенных комплексных соединений при взаимодействии альбумина с бромкрезоловым знленым в слабокислой среде в присутствии детергента.

Интенсивность окраски пробы при длине волны 630 нм прямо пропорциональна концентрации альбумина в ней.
Линейность метода: 20-60 г/л.

Норма: 35-50 г/л. (18-25С);
Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 630 (590-640) нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 18-25С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 5мкл и 1000 мкл;

  4. Сыворотка крови/ плазма негемолизированные;

  5. Рабочий реагент (бромкрезоловый зеленый 74 мг, детергент Тритон Х-100 в ацетатном буфере, рН , 1000 мл);

  6. Стандарт (раствор альбумина 40 г/л);

  7. Дистиллированная вода.


Проведение анализа

Добавить в кювету

Опытная проба

Холостая проба

Стандартная проба

1. Сыворотка

5 мкл

--

--

2. Стандарт

--

--

5 мкл

3. Дистиллиро-ванная вода

--

5 мкл

--

4. Рабочий реагент

1 мл

1 мл

1 мл


Перемешать тщательно в течение 15 секунд содержимое пробирок, избегая образования пены. Инкубировать при комнатной температуре 10 минут. Измерить оптическую плотность опытной и стандартной проб против холостой пробы при длине волны 630 (590-640) нм. Окраска стабильна в течение 8 часов.
Расчет
Расчет по стандарту концентрации альбумина в сыворотке (плазме) проводят по формуле:


Аоп

С (г/л) = -----------  Сст,

Аст

где Аоп и Аст – оптическая плотность опытной и стандартной проб,

соответственно;

Сст – концентрация стандарта.

Если концентрация альбумина превышает 60 г/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемый образец (сыворотка или плазма) следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2.
Клинико-диагностическое значение: Гиперальбуминемия наблюдается при тех же состояниях, что и гиперпротеинемия.

Гипоальбуминемия наступает при больших потерях белка, связанных с кровотечением, нарушением синтеза белка в печени и усилением процессов его распада.



связь с админом