Главная страница

Определение СРБ. Определение концентрации с-реактивного белка в сыворотке крови иммунотурбидиметрическим методом Принцип метода


Скачать 27,5 Kb.
НазваниеОпределение концентрации с-реактивного белка в сыворотке крови иммунотурбидиметрическим методом Принцип метода
АнкорОпределение СРБ.doc
Дата20.10.2016
Размер27,5 Kb.
Формат файлаdoc
Имя файлаOpredelenie_SRB.doc
ТипДокументы
#46
Каталогtopic46603054_27329484

С этим файлом связано 97 файл(ов). Среди них: sbornik_situatsionnykh_zadach_po_biokhimii-1.docx, Metodichka_po_vitaminam_MGMSU.rar, Vvedenie_v_obmen_v-v.rar и ещё 87 файл(а).
Показать все связанные файлы

Определение концентрации С-реактивного белка в сыворотке крови иммунотурбидиметрическим методом
Принцип метода: С-реактивный белок (СРБ) сыворотки взаимодействует с моноспецифическими антителами, присутствующими в избытке в реакционной смеси с образованием преципитата, усиленного ПЭГ.

Турбидиметрическое определение концентрации СРБ основано на регистрации оптической плотности анализируемой пробы при длине волны 340 нм.
Диапазон измерения метода: 8-150 мг/л.

Норма: до 10 мг/л (37С);
СРБ в сыворотке сохраняет стабильность при замораживании (-20С) в течение 6 месяцев.
Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 340 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 75 мкл, 200 мкл и 1000 мкл;

  4. Сыворотка крови негемолизированная / плазма;

  5. СРБ-буфер (ТРИС-буфер 0,01 моль/л, содержащий 5% ПЭГ);

  6. Антисыворотка против СРБ;

  7. Калибровочные растворы №№ 1-5 с указанной на этикетках концентрацией СРБ;

  8. Физиологический раствор (хлорид натрия 0,9%).

Антисыворотка разводится в 3 раза (1:2) СРБ буфером с ПЭГ (полиэтиленгликолем). Разведенная антисыворотка годна для применения при условии хранения его при температуре 2-8С в течение 30 дней.
Проведение анализа

Перед проведением анализа реагенты следует прогреть до температуры измерения (37С).


Добавить в кювету


Холостая проба

Опытная проба

Стандартная проба

1. Стандарт

--

--

75 мкл

2. Сыворотка

--

75 мкл

--

3. Буфер для СРБ

1 мл

1 мл

1 мл

Перемешать в течение 15 с. Инкубировать 10 минут при температуре 37С. Измерить оптическую плотность холостой пробы.

4. Антисыворотка против СРБ

--

200 мкл

200 мкл


Перемешивать содержимое пробирок в течение 15 секунд. Измерить оптическую плотность проб при длине 340 нм ровно через 5 минут после добавления антисыворотки.
Расчет

Расчет концентрации СРБ проводят по нелинейной калибровочной кривой:


стандар-та

Оптическая плотность при 340 нм

стандар-та

Оптическая плотность при 340 нм

Стандарт 1




Стандарт 4




Стандарт 2




Стандарт 5




Стандарт 3











Если концентрация СРБ пробы выше самой высокой концентрации стандартного раствора СРБ(точка вне рабочей зоны калибровочного графика), анализируемую сыворотку следует развести 1:4 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат умножить на 5.
Клинико-диагностическое значение: СРБ – это 2-глобулин и компонент неспецифического иммунного ответа на ранних стадиях проникновения антигена в организм. СРБ способствует удалению из крови эндогенных веществ, образующихся в результате разрушения клеток организма (полисахариды, гликопротеины, нуклеиновые кислоты, фосфатидилхолин и пр.).

СРБ относится к белкам острой фазы. При тяжелых воспалениях синтез его в печени возрастает более, чем в тысячу раз. Уровень СРБ в крови увеличивается в течение 6-10 часов в реакциях острой фазы (разрушение тканей, воспаление).

Концентрация СРБ у курильщиков может достигать 25 мг/л. После хирургического вмешательства (если нет осложнений) СРБ держится в течение 2 дней на уровне до 150 мг/л, а затем возвращается в норму.

Плохим прогностическим признаком является СРБ  200 мг/л на протяжении 10 дней и более после хирургического вмешательства. За 1-2 дня до летального исхода СРБ заметно увеличивается.

Определение концентрации СРБ используют для отличия бактериальных инфекций от вирусных. Концентрация СРБ до 50 мг/л обычно наблюдается при легких вирусных инфекциях и местных бактериальных инфекциях; 50-150 мг/л – в основном при бактериальных инфекциях и в отдельных случаях при тяжелых вирусных инфекциях;  150 мг/л – при тяжелых бактериальных инфекциях.

Максимальная концентрация СРБ может доходить до 400 мг/л у новорожденных и примерно до 850 мг/л у взрослых.


перейти в каталог файлов
связь с админом