Главная страница

Шпоры. Практикум. Количественное определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом Принцип метода


НазваниеКоличественное определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом Принцип метода
Родительский файлShpory.zip
АнкорШпоры.zip
Дата26.06.2008
Размер100 Kb.
Формат файлаdoc
Имя файлаПрактикум.doc
ТипДокументы
#18
Каталогtopic46603054_27329484
Полное содержание архива Шпоры.zip:
1. Обмен и ф.doc
31,5 Киб.
Обмен и ф-ии углеводов Углеводы: моносахариды
2. экзам.doc
88 Киб.
Обмен и ф-ции липидов. 78. В-окисение насыщенных жирных к-т
3. бббхххх.doc
100,5 Киб.
Представлене о синтезе пуриновых нуклеотидов
4. Гормоны.doc
47,5 Киб.
Нейрогормоны стимулирующие выделение тропных гормонов гипофиза
5. Азотсод..doc
2308 Киб.
83 Гниение амк в кишечнике
6. Практикум.doc
100 Киб.
Количественное определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом Принцип метода
7. АААААААААА.doc
286,5 Киб.
Важнейшие липиды тканей человека
8. Водорастворимые витамины.doc
61,5 Киб.
Водорастворимые витамины
9. шпоры по бх.docx
162,59 Киб.
Метаболизм эндогенных и чужеродных токсических веществ: реакции коньюгации с глукуроновой кислотой, серной кислотой, глицином
10. Копия шпоры по бх word 97-2003.doc
203,5 Киб.
Метаболизм эндогенных и чужеродных токсических веществ: реакции коньюгации с глукуроновой кислотой, серной кислотой, глицином

С этим файлом связано 97 файл(ов). Среди них: sbornik_situatsionnykh_zadach_po_biokhimii-1.docx, Metodichka_po_vitaminam_MGMSU.rar, Vvedenie_v_obmen_v-v.rar и ещё 87 файл(а).
Показать все связанные файлы

Количественное определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом

Принцип метода: Ионы меди в щелочной среде реагируют с белком с образованием комплекса фиолетового цвета. Оптическая плотность образующегося комплекса прямо пропорциональна содержанию белка в пробе.

Линейность метода: 10 – 150 г/л.

Норма: 62 – 85 г/л.

Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 540 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 18-25С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 20 мкл и 1000 мкл;

  4. Сыворотка крови;

  5. Физиологический раствор;

  6. Реагент (гидроксид натрия – 600 ммоль/л, калий-натрий тартрат – 32 ммоль/л, сульфат меди – 12 ммоль/л, иодид калия – 30 ммоль/л);

  7. Калибратор – калибровочный раствор общего белка, 80,0 г/л.


Клинико-диагностическое значение.

Гипопротеинемия наблюдается при нефротическом синдроме, синдроме мальабсорбции, заболеваниях кожи (ожог, экзема), массивных кровотечениях, задержке солей и воды (заболевания почек), неправильном питании и голодании. Нарушением синтеза белка, приводящему к снижению его концентрации в сыворотке крови, сопровождаются раковая кахексия, длительные воспалительные процессы.

Гиперпротеинемия наблюдается при состояниях и болезнях, сопровождающихся дегидратацией организма (тяжелые травмы, понос, рвота, сахарный диабет). Она характерна также для хронических воспалительных заболеваний (ревматоидный артрит, диффузные болезни соединительной ткани – коллагенозы, цирроз печени) и острых воспалительных процессов в стадии острой фазы, наблюдается также при макроглобулинемии Вальденстрема.

Разделение белков сыворотки крови методом электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы

Принцип метода: Белки являются амфотерными электролитами. Направление движения белков в электрическом поле зависит от рН среды. Коллоидные частицы белка перемещаются в электрическом поле постоянного тока к аноду – в щелочной среде, к катоду – в кислой среде.

Разделение белков сыворотки обычно проводят в буферном растворе при рН 8,6 – 8,9. В качестве носителя используют пленки из ацетата целлюлозы. В этих условиях заряженные белки сыворотки крови перемещаются по смоченным пленкам из ацетата целлюлозы в направлении анода со скоростью, зависящей от величины заряда и относительной молекулярной массы белка. Этот след представляет собой дорожку, на которой после окрашивания ясно видны места концентрации белков различных фракций. Наиболее быстро движутся альбумины, затем 1-, 2-, -глобулины, и, наконец, -глобулины. По этим следам (дорожкам) можно определить содержание белка в различных белковых фракциях пробы. Методом электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы можно получить 5 и более белковых фракций.

Оборудование и реагенты:

  1. Аппарат для электрофореза;

  2. Источник постоянного тока;

  3. Денситометр;

  4. Веронал-мединаловый буфер, рН 8,6;

  5. Раствор амидо черного для окрашивания электрофореграммы (амидо черный 250 мг в 100 мл 7% уксусной кислоты);

  6. Раствор для отмывания (5-7% уксусная кислота)

  7. Раствор для просветления пластинок из ацетата целлюлозы (смесь этанола, уксусной кислоты и глицерина);

  8. Сыворотка крови;

  9. Дистиллированная вода.

Просветления пластинок из ацетата целлюлозы можно достигнуть также, погрузив пластинки на 2-3 минуты в глицерин или вазелиновое масло.

Клинико-диагностическое значение: Электрофорез белков сыворотки крови имеет диагностическое значение в наблюдении за динамикой патологического процесса и оценке эффективности медикаментозного лечения.

Увеличение содержания -глобулинов в сыворотке характерно для острых воспалительных заболеваний, так ка в данную фракцию входят белки острой фазы.

Во фракцию -глобулинов входит также и большинство гликопротеинов крови. Поэтому ее содержание увеличивается при различных хронических заболеваниях, раке, травмах, ревматизме и инфаркте миокарда.

Повышение -глобулинов в сыворотке чаще наблюдается при гиперлипопротеинемиях различного происхождения, так как в эту фракцию входят липопротеины.

Фракция -Глобулинов состоит из иммуноглобулинов и увеличивается при заболеваниях, связанных с интенсивными иммунными процессами, а также при миеломных болезнях.

Гипогаммаглобулинемия может носить врожденный характер или быть обусловленной истощением иммунной системы (рак, хронические воспалительные процессы, аллергические заболевания, СПИД).

Определение общей активности креатинкиназы в сыворотке крови кинетическим методом

Принцип метода: Креатинкиназа (КК) катализирует обратимое фосфорилирование АДФ в присутствии креатинфосфата с образованием АТФ и креатина. Фермент гексокиназа (ГК) катализирует фосфорилирование глюкозы АТФ с образованием АДФ и глюкозо-6-фосфата. Затем глюкозо-6-фосфат под действием глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы (Г6ФДГ) окисляется до 6-фосфоглюконата с одновременным восстановлением НАД+ до НАДН.

Кинетическое спектрофотометрическое определение активности КК основано на регистрации возрастания оптической плотности анализируемой пробы при длине волны 340 нм. Скорость увеличения оптической плотности пробы при длине волны 340 нм прямо пропорциональна активности КК в ней.
Линейность метода: до 1500 Е/л.

Норма: мужчины – 0-160 Е/л (37С);

женщины – 0-130 Е/л (37С).

Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 340 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 25 мкл и 1000 мкл;

  4. Сыворотка крови;

  5. Дистиллированная вода;

  6. Рабочий реагент (креатинфосфат – 30 ммоль/л, АДФ – 2,0 ммоль/л, D-глюкоза – 20 ммоль/л, НАД+ - 2,0 ммоль/л, ГК - > 2500 Е/л, Г6ФДГ - > 2000 Е/л, буфер (рН 6,70,1) – 100 ммоль/л).

Рабочий реагент годен для применения, если его оптическая плотность не выше 0,7 единиц оптической плотности при длине волны 340 нм.

Клинико-диагностическое значение: Повышение активности КК в сыворотке крови может быть следствием повреждения сердечной или скелетной мускулатуры.

При поражении сердечной мышцы (инфаркт миокарда, миокардит, сердечные аритмии, сердечная недостаточность) активность КК может вырасти в 20-30 раз по сравнению с нормой.

При поражении скелетной мускулатуры уровень активности КК возрастает еще больше.

При инфаркте миокарда, как правило, подъем активности КК наступает через 4-8 часов после начала болевого приступа, достигает максимума через 16-36 часов, и нормализуется к 3-6 дню. МВ-фракция КК является высокоспецифичной для сердечной мышцы, ее активность, как правило, значительно повышается при инфаркте миокарда.

Повышение активности КК может быть вызвано и другими причинами, например: употреблением алкоголя, отравлением снотворным, внутривенным введением ряда лекарственных препаратов.

Определение концентрации глюкозы в крови ферментативным методом (с помощью прибора контроля уровня глюкозы в крови ONE TOUCH BASIC PLUS)

Принцип метода: Система контроля уровня глюкозы в крови ONE TOUCH BASIC PLUS предназначена для определения уровня глюкозы в цельной крови в домашних и клинических условиях. Система включает в себя прибор ONE TOUCH BASIC PLUS, тест-полоски, ланцеты и флакон с контрольным раствором.

Тест основан на глюкозооксидазной реакции, специфичной для глюкозы. На любые другие сахара тест не реагирует. После нанесения крови на тест-полоску компоненты последней реагируют с кровью в следующей последовательности

Пероксид водорода реагирует с хромогеном (4-аминоантипирин) с образованием красителя хинонимина:

Интенсивность окраски пятна при длине волны 505 нм прямо пропорциональна концентрации глюкозы в нем.
Линейность метода: до 33,3 ммоль/л.

Норма:

Цельная кровь – 3,3-5,5 ммоль/л (18-25С);

Сыворотка – 3,8-6,1 ммоль/л.
Оборудование и реагенты:

  1. прибор ONE TOUCH BASIC PLUS;

  2. тест-полоски;

  3. ланцеты;

  4. Стандарт (контрольный раствор 4,8-6,8 ммоль/л).

Клинико-диагностическое значение: Увеличенные уровни глюкозы в крови (гипергликемия) характерны для сахарного диабета, гиперфункции щитовидной железы, гипофиза и надпочечников.

Концентрация глюкозы в крови ниже нормы (гипогликемия) наблюдается при инсулин-секретирующих опухолях, микседеме, гипофункции гипофиза, гипофункции надпочечников, и в случае введения пациенту сверхбольшой дозы инсулина.

Определение активности лактатдегидрогеназы в сыворотке крови кинетическим методом

Принцип метода: Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) в сыворотке катализирует окисление молочной кислоты до пировиноградной кислоты с одновременным восстановлением НАД+ до НАДН.

Скорость увеличения оптической плотности раствора прямо пропорциональна активности ЛДГ в пробе и измеряется спектрофотометрически при длине волны 340 нм.
Линейность метода: до 800 Е/л.

Норма: мужчины – 80-285 Е/л (37С);

женщины – 103-227 Е/л (37С).
ЛДГ в негемолизированной сыворотке следует определять сразу после взятия крови. ЛДГ в сыворотке сохраняет стабильность при комнатной температуре (18-25С) в течение 2-3 дней. Не замораживать и не прогревать сыворотку до 37С!, поскольку при этом термолабильные изоэнзимы ЛДГ могут дезактивироваться.
Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 340 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 25 мкл и 1000 мкл;

  4. Сыворотка крови;

  5. Дистиллированная вода;

  6. Рабочий реагент (L-лактат – 50 ммоль/л, НАД+ – 7,0 ммоль/л, ТРИС-буфер (рН 9,00,1)).

Клинико-диагностическое значение: Активность ЛДГ в сыворотке крови повышается при различных заболеваниях (инфаркт миокарда, лейкозы, заболевания почек, инфекционный мононуклеоз, повреждение паренхимы печени, мышечные дистрофии, опухолевые новообразования).

Из-за отсутствия органной специфичности ЛДК в диагностике чаще применяют определение активности ее изоферментов, чем общую активность ЛДГ.

Общая активность ЛДГ в сыворотке при инфаркте миокарда достигает максимума через 24-36 часов после начала болевого приступа, но приходит к норме медленнее, по сравнению с КК и АСТ, на 8-10 день.

Увеличение активности в сыворотке изофермента ЛДГ1 специфично для поражения миокарда. Для заболеваний скелетной мускулатуры характерно повышение изофермента ЛДГ5. Заболевания печени сопровождаются разными изоферментными спектрами ЛДГ: для острого гепатита характерно резкое увеличение ЛДГ5 и ЛДГ4 и уменьшение ЛДГ1 и ЛДГ2; при циррозе увеличена активность ЛДГ5; при холецистите активность ЛДГ5 увеличена незначительно.

В опухолевых тканях преобладают изоформы ЛДГ5 и ЛДГ4. При лейкозах обнаружена корреляция активности ЛДГ2 и ЛДГ3 от количества незрелых клеток.

Определение содержания триацилглицеролов сыворотке крови ферментативным методом

Принцип метода: Метод определения триацилглицеролов (ТАГ) основан на реакции их гидролитического расщепления под действием фермента липазы. Высвободившийся глицерол далее ферментативно окисляется с образованием перекиси водорода. Перексид водорода реагирует с хромогеном под действием пероксидазы с образованием окрашеного хинонимина.

Интенсивность образующейся окраски прямо пропорциональна содержанию триацилглицеролов в пробе.
Линейность метода: до 11,4 ммоль/л.

Норма: 0,6 – 2,3 ммоль/л.
Триацилглицеролы в негемолизированной сыворотке сохраняют стабильность при температуре хранения 2-8С в течение нескольких дней.
Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 540 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 10 мкл и 1000 мкл;

  4. Сыворотка крови;

  5. Дистиллированная вода;

  6. Рабочий реагент (АТФ – 1 ммоль/л, 4-аминоантипирин – 0,4 ммоль/л, глицеролфосфатоксидаза (ГФО) –  2000 Е/л, липаза – 200 000 Е/л, глицеролкиназа (ГК) –  6000 Е/л, пероксидаза –  500 Е/л в буфере);

  7. Калибратор – калибровочный раствор триацилглицеролов, 2,28 ммоль/л.


Клинико-диагностическое значение: ТАГ определяют для типирования эссенциальных гиперлипопротеинемий. Например, гиперлипопротеинемия типа  отличается высоким уровнем холестерина в сыворотке по сравнению с типом , для которой характерно высокие уровни холестерина и ТАГ.

Повышение уровня ТАГ в сыворотке бывает и при других заболеваниях (переломы костей, нефротический синдром, гипотиреоз, алкоголизм), но диагностического значения в этих случаях не имеет.

Иногда, при несвоевременном заборе биоматериала, можно обнаружить алиментарную гипертриглицеридемию, характеризующуюся высокими концентрациями ТАГ после приема жирной пищи.

Определение концентрации общего холестерола в сыворотке крови ферментативным методом

Принцип метода: Эфиры холестерола под действием фермента холестеролэстеразы распадаются на холестерол и жирные кислоты. Холестерол окисляется холестеролоксидазой с образованием перекиси водорода. Пероксид водорода реагирует с хромогеном с образованием окрашенного вещества (хинонимин):

Интенсивность окраски раствора при длине волны 550 нм прямо пропорциональна концентрации холестерола в нем.
Линейность метода: до 19,4 ммоль/л.

Норма:

Сыворотка крови –  5,2 ммоль/л (37С).
Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 550 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 10 мкл и 1000 мкл;

  4. Сыворотка крови;

  5. Реагент (холестеролэстераза, холестеролоксидаза  50 Е/л, пероксидаза  1000 Е/л, 4-аминоантипирин 0,3 ммоль/л);

  6. Стандарт (Холестерол 5,2 ммоль/л);

  7. Дистиллированная вода.


Клинико-диагностическое значение: Уровни холестерола важны в диагностике и классификации гиперлипопротеинемий.

Концентрация холестерина в сыворотке указывает на работу печени, билиарного тракта, всасывание в кишечнике.

Высокие концентрации холестерина говорят об угрозе ишемической болезни сердца, о нарушении тиреоидной функции и заболеваниях надпочечников.

Определение концентрации холестерина ЛПВП в сыворотке крови

Принцип метода: Холестерол липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) определяют после осаждения из сыворотки липопротеинов низкой и очень низкой плотности (ЛПНП и ЛПОНП, соответственно). Супернатант содержит холестерол, связанный с ЛПВП в растворенной форме и определяется ферментативным методом для определения концентрации общего холестерола.

Интенсивность окраски раствора при длине волны 550 нм прямо пропорциональна концентрации холестерола в ЛПВП.
Линейность метода: до 19,4 ммоль/л.

Норма:

Сыворотка крови –  0,9 ммоль/л (37С).
Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 550 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 10 мкл, 400 мкл , 2 мл и 1000 мкл;

  4. Сыворотка крови;

  5. Осаждающий реагент (хлорид магния, 100 ммоль/л в ортофосфорной кислоте, 30,3 ммоль/л)

  6. Реагент (холестеролэстераза, холестеролоксидаза  50 Е/л, пероксидаза  1000 Е/л, 4-аминоантипирин 0,3 ммоль/л);

  7. Стандарт (Холестерол 1,2 ммоль/л);

  8. Дистиллированная вода.

Клинико-диагностическое значение: Содержание холестерола в ЛПВП в кови здоровых людей мало меняется с возрастом и не подвержено колебаниям.

Величины содержания холестерола в ЛПВП  0,9 ммоль/л свидетельствуют о нарушении липидного обмена и угрозе атеросклероза. Повышение содержания холестерола в ЛПВП, как и повышение содержания общего холестерина в результате увеличения этой фракции, является доброкачественным состоянием.

Определение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови кинетическим методом

Принцип метода: Аланинаминотрансфераза (АЛТ) катализирует обратимое трансаминирование L-аланина в L-глутамат с образованием пировиноградной кислоты. Далее пировиноградная кислота под действием лактатдегидрогеназы (ЛДГ) восстанавливается до D-лактата с одновременным окислением НАДН до НАД+.

Кинетическое спектрофотометрическое определение активности АЛТ основано на регистрации падения оптической плотности анализируемой пробы при длине волны 340 нм. Скорость снижения оптической плотности пробы при длине волны 340 нм прямо пропорциональна активности АЛТ в ней.
Линейность метода: 4-280 Е/л.

Норма: мужчины –  41 Е/л (37С);

женщины –  31 Е/л (37С).
АЛТ в сыворотке сохраняет стабильность при комнатной температуре (18-25С) в течение 24 часов, при замораживании (-20С) в течение 3 месяцев.
Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 340 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 100 мкл и 1000 мкл;

  4. Сыворотка крови / гепаринизированная или ЭДТА плазма;

  5. Реагент 1 (L-аланин 500 ммоль/л, ЛДГ  1200 Е/л в ТРИС-буфере (рН 7,50,1) – 100 ммоль/л);

  6. Реагент 2 (-кетоглутарат 15 ммоль/л, НАДН 0,18 ммоль/л);

  7. Монореагент (смешать 4 части реактива 1 с одной частью реактива 2).

Монореагент годен для применения при условии хранения его в темноте при температуре 2-8С в течение 4 недель.

Клинико-диагностическое значение: АЛТ в высоких концентрациях присутствует в клетках печени и в меньшей степени в скелетных мышцах, почках и сердце.

Наиболее часто повышение активности АЛТ в сыворотке отмечается при острых заболеваниях печени и желчных путей. У больных острыми вирусными гепатитами активность фермента резко повышается в ранние сроки болезни, обычно за 5-2 дня до появления желтухи. Пик активности АЛТ приходится на момент появления желтухи и нормализуется к исходу 8-й недели болезни. Длительное незначительное увеличение активности АЛТ в сыворотке часто свидетельствует о хроническом процессе заболевания (хронический гепатит, цирроз.

Определение активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови кинетическим методом

Принцип метода: Аспартатаминотрансфераза (АСТ) катализирует обратимое трансаминирование L-аспартата в L-глутамат с образованием щавелевоуксусной кислоты. Далее щавелевоуксусная кислота под действием малатдегидрогеназы (МДГ) восстанавливается до малата с одновременным окислением НАДН до НАД+.

Кинетическое спектрофотометрическое определение активности АСТ основано на регистрации уменьшения оптической плотности анализируемой пробы при длине волны 340 нм. Скорость снижения оптической плотности пробы при длине волны 340 нм прямо пропорциональна активности АСТ в ней.
Линейность метода: до 300 Е/л.

Норма: 8-40 Е/л (37С);
АСТ в сыворотке сохраняет стабильность при комнатной температуре (18-25С) в течение 4 дней, при замораживании (-20С) в течение 14 дней.

Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 340 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 100 мкл и 1000 мкл;

  4. Сыворотка крови негемолизированная;

  5. Реагент (-кетоглутарат 12 ммоль/л, L-аспартат 200 ммоль/л, НАДН 0,2 ммоль/л, МДГ  600 Е/л в ТРИС-буфере (рН 7,80,1),100 ммоль/л);

  6. Дистиллированная вода.

Реагент годен для применения при условии хранения его при температуре 2-8С в течение 10 дней.

Клинико-диагностическое значение: АСТ в высоких концентрациях присутствует в клетках сердечной мышцы, печени, почках и эритроцитах. Поражение любого из этих органов и тканей может привести к значительному повышению активности АСТ в сыворотке.

Наиболее резкие изменения в каталитической концентрации АСТ наблюдаются при поражении сердечной мышцы. При остром инфаркте миокарда увеличение активности АСТ обычно начинается через 6-12 часов после возникновения боли, достигает максимума через 24-48 часов, а затем постепенно падает, возвращаясь в норму через 4-5 дней с начала приступа. Если в течение нескольких дней нормализации активности фермента не происходит, то это свидетельствует о расширении зоны инфаркта и является плохим прогностическим признаком.

Умеренное повышение активности АСТ в сыворотке характерно для хронических и инфильтративных болезней печени (цирроз, механическая желтуха, метастазы опухоли в печени), а также при поражении скелетной мускулатуры (прогрессирующая мышечная дистрофия, разможжение мышц, травма).
Коэффициент Де Ритиса

Коэффициент Де Ритиса – это отношение активностей АСТ/АЛТ. В норме он равен 0,6-0,8.

При вирусных гепатитах его значения варьируют в пределах 0,2-0,5. В разгар болезни коэффициент Де Ритиса может вырасти до 1,0 (активности АСТ и АЛТ очень высоки) и выше – это плохой прогностический признак, свидетельствующий о наступлении дистрофии печени.

Значение коэффициента Де Ритиса при обтурационных желтухах, циррозах и хронических заболеваниях печени, как правило, > 1, при этом наблюдается незначительное повышение активности ферментов АСТ и АЛТ.

Определение концентрации мочевины в сыворотке крови ферментативным методом

Принцип метода: Мочевина под действием фермента уреазы распадается на углекислый газ и аммиак. Аммиак реагирует с хромогеном (фенол-гипохлорит) в присутствии акселератора реакции нитропруссида натрия с образованием синего красителя:

Интенсивность окраски раствора при длине волны 500-650 нм прямо пропорциональна концентрации мочевины в нем.
Линейность метода: до 26,8 ммоль/л.

Норма:

Сыворотка крови – 2,5-6,4 ммоль/л (37С).

Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 500-650 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 10 мкл, 2,5 мл;

  4. Сыворотка крови;

  5. Реагент (фенол-гипохлорит, нитропруссид натрия, уреаза в буфере, рН 6,5 );

  6. Стандарт (раствор мочевины 10,6 ммоль/л);

  7. Дистиллированная вода.

Клинико-диагностическое значение: Отклонения от нормы содержания мочевины в сыворотке крови зависят от скорости ее биосинтеза и выделения.

Увеличение концентрации мочевины в сыворотке крови – один из главных признаков нарушения функции почек. Из фракций остаточного азота раньше всего повышается уровень мочевины и может достигать 90% от всего остаточного азота.

Повышение концентрации мочевины в сыворотке крови может носить и внепочечный характер: при потере жидкости организмом, при усиленном распаде белков (острая желтая атрофия печени, тяжелые заболевания).

Уменьшение содержания мочевины в сыворотке крови наблюдается при заболеваниях печени (паренхиматозная желтуха, цирроз) по причине нарушенного синтеза мочевины в гепатоцитах.

Определение концентрации мочевой кислоты в биологических жидкостях ферментативным методом

Принцип метода: Мочевая кислота под действием фермента уриказы окисляется до алантоина с образованием перекиси водорода. Пероксид водорода реагирует с хромогеном (4-аминоантипирин с N-этил-N-(гидрокси-3-сульфопропил)-m-толуидином [TOOS]) с образованием сине-фиолетового красителя:

Интенсивность окраски раствора при длине волны 550 нм прямо пропорциональна концентрации мочевой кислоты в нем.
Линейность метода: 65,7 -1190 мкмоль/л.

Норма:

Сыворотка крови – мужчины – 214-488 мкмоль/л (25-37С);

женщины – 137-363 мкмоль/л (25-37С).
Концентрация мочевой кислоты сохраняется стабильной в сыворотке/ плазме в течение 3 дней при комнатной температуре, при температуре хранения 2-8С – в течение 7 дней, при температуре –20С – в течение 6 месяцев.

Стабильность концентрации мочевой кислоты в моче – 4 дня при комнатной температуре.

Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 550 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 25-37С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 20 мкл, 250 мкл и 1000 мкл;

  4. Сыворотка крови/ гепаринизированная или ЭДТА- плазма / моча. Мочу предварительно развести дистиллированной водой в соотношении 1:10;

  5. Реагент 1 (ТООS 1 ммоль/л в фосфатном буфере, рН 7,0 100 ммоль/л);

  6. Реагент 2 (уриказа  50 Е/л, пероксидаза  1000 Е/л, 4-аминоантипирин 0,3 ммоль/л в фосфатном буфере, рН 7,0 100 ммоль/л);

  7. Стандарт (раствор мочевой кислоты 357 мкмоль/л);

  8. Дистиллированная вода.

Клинико-диагностическое значение: Мочевая кислота и ее соли являются конечными продуктами пуринового обмена.

При подагре, наиболее общем осложнении гиперурикемии, повышенный уровень мочевой кислоты в сыворотке крови ведет к образованию вокруг суставов кристаллов моноуреата натрия. Гиперурикемия наблюдается также при заболеваниях почек с пониженной экскрецией отходов жизнедеятельности, при голодании, употреблении наркотиков, избыточном потреблении алкоголя, а также при приеме некоторых лекарств. Гиперурикемия – составная часть непрямого фактора риска коронарной болезни сердца.

Гипоурикемия наблюдается редко и связана с редкими наследственными нарушениями метаболизма.

Определение концентрации общего билирубина в сыворотке крови

Принцип метода: В кислой среде в присутствии диазотированного 2,4-дихлоранилина билирубин образует азосоединение красного цвета. Специфическая смесь детергентов делает возможным надежное и точное определение общего билирубина.

Интенсивность окраски раствора при длине волны 540-560 нм прямо пропорциональна концентрации билирубина в нем.
Линейность метода: 1,7 - 513 мкмоль/л.

Норма:

Сыворотка крови – 1,7-21 мкмоль/л (25-37С).
Концентрация общего билирубина сохраняется стабильной, при условии непопадании солнечного света на образцы, в сыворотке/ гепаринизированной или ЭДТА-плазме в течение 1 дня при комнатной температуре, при температуре хранения 2-8С – в течение 7 дней, при температуре –20С – в течение 3 месяцев.
Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 540-560 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 25-37С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 25 мкл, 250 мкл и 1000 мкл;

  4. Сыворотка крови/ гепаринизированная или ЭДТА-плазма;

  5. Реагент 1 (детергент в ТРИС-буфере, рН 8,2 8 ммоль/л);

  6. Реагент 2 (соляная кислота 30 ммоль/л, 2,4-дихлорфенол 1 ммоль/л, детергент, диазониевая соль);

  7. Стандарт (раствор билирубина, 100 мкмоль/л);

  8. Дистиллированная вода.

Клинико-диагностическое значение: Билирубин – это продукт распада гемоглобина. Свободный (неконъюгированный) билирубин совершенно неполярен и почти нерастворим в воде, поэтому для транспортирования его в крови от селезенки к печени образуется комплекс с альбумином. В печени билирубин конъюгирует с глюкуроновой кислотой, а образующийся комплекс билирубин–глюкуроновая кислота (связанный билирубин) экскретируется в желчные протоки.

Гипербилирубинемия может бить вызвана увеличенным образованием свободного билирубина в результате гемолиза (гемолитическая/ прегепатитная желтуха), повреждения паренхимы печени (паренхиматозная/ интрагепатитная желтуха) или закупорки желчных протоков (обтурационная/ постгепатитная желтуха).

Хроническая врожденная гипербилирубинемия (преобладание свободного билирубина) называется синдромом Гилберта и встречается довольно часто.

Высокие уровни билирубина наблюдаются у 60-70% новорожденных из-за усиленного послеродового разрушения эритроцитов и отставания в активности ферментов деградации билирубина.

Общепринятые методы анализа определяют либо общий, либо прямой билирубин. Прямой билирубин – это конъюгированный, растворимый в воде билирубин. Следовательно, неконъюгированный (свободный) билирубин может быть оценен как разница между общим и прямым билирубином.




перейти в каталог файлов
связь с админом